Molekularbiologische Methoden 2.0
In den vergangenen Jahren hat sich die Molekularbiologie rasant weiterentwickelt. Technologien wie die Modulare Klonierung, PCR-basierte Klonierungen und das Gibson Assembly sind inzwischen in vielen Laboren als Standard etabliert. Neben den modernen...
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Produktinformationen zu „Molekularbiologische Methoden 2.0 “
Klappentext zu „Molekularbiologische Methoden 2.0 “
In den vergangenen Jahren hat sich die Molekularbiologie rasant weiterentwickelt. Technologien wie die Modulare Klonierung, PCR-basierte Klonierungen und das Gibson Assembly sind inzwischen in vielen Laboren als Standard etabliert. Neben den modernen Klonierungsverfahren wurden die die Denkansätze in der modernen Biologie revolutionierende Bioinformatik und die synthetische Biologie aufgenommen. Die zunehmende Bedeutung reicht inzwischen weit in die Gesellschaft hinein, wie die "Omics"-Technologien und die Genom Editierung zeigen, die ebenfalls in diesem Buch behandelt werden.Die 3. Auflage wurde korrigiert und aktualisiert und enthält viele hilfreiche Tipps und Tricks, welche die Fehlersuche im Labor erleichtern können. Concept-Maps visualisieren Zusammenhänge zwischen den vorgestellten Methoden. Zahlreiche Abbildungen und Tabellen veranschaulichen komplexe Sachverhalte, "Gut zu wissen"-Boxen liefern Hintergrundinformationen, "Tipp"-Boxen geben wertvolle Hinweise für die praktische Arbeit und Protokolle besonders wichtiger Verfahren erleichtern das Verständnis.Ideal für Studium und Praxis!
Inhaltsverzeichnis zu „Molekularbiologische Methoden 2.0 “
Vorwort zur 1. Auflage12 Vorwort zur 2. Auflage13 Vorwort zur 3. Auflage13 1 Das Leben und seine Bestandteile 1.1 Der Aufbau von DNA und RNA17 1.2 Der genetische Code20 1.3 Die Gene22 1.3.1 Die Genstruktur in Prokaryoten22 1.3.2 Genstruktur in Eukaryoten 24 1.4 Proteine 26 1.5 Die Zelle30 2 Grundlagen der Arbeit im Labor 2.1 Wasser34 2.2 Messung des pH-Werts35 2.3 Puffer36 2.4 Waagen36 2.5 Mikropipetten38 2.6 Gefässe im Labor40 2.7 Zentrifugen41 2.8 Mischen und Konzentrieren44 2.8.1 Konzentrieren45 2.8.2 Pufferwechsel 45 2.9 Probenlagerung46 2.10 Steriles Arbeiten46 2.11 Geräte für den Aufschluss von Geweben49 2.12 Pflege und Aufzucht von Escherichia coli51 2.12.1 Nährmedien52 2.12.2 Antibiotika53 2.12.3 Lagerung von Bakterien55 3 Aufreinigung von Nukleinsäuren 3.1 Gegenspieler erfolgreicher DNA- und RNA-Isolationen59 3.1.1 Nukleasen59 3.1.2 Scherkräfte60 3.1.3 Chemische Verunreinigungen60 3.1.4 EDTA und zweiwertige Ionen: das Yin und Yang der Molekularbiologie61 3.2 Extraktion von Nukleinsäuren62 3.3 Die weitere Aufreinigung der DNA64 3.3.1 Phenolextraktion64 3.3.2 Ethanolfällung65 3.3.3 Isopropanolfällung67 3.3.4 PEG-Fällung 68 3.3.5 Entfernen von Polysacchariden mit CTAB68 3.3.6 Tropfendialyse68 3.4 Silica Matrices69 3.4.1 Von Nukleinsäuren und Silica Matrices69 3.4.2 Übersicht über den Einsatz von Kits70 3.5 Ausgewählte DNA Aufreinigungsverfahren71 3.5.1 Die Plasmidpräparation aus E. coli 71 3.5.2 Die Isolation von DNA aus Pflanzen mit CTAB72 3.5.3 Isolation von DNA aus Blut oder Zellkulturen74 3.5.4 Isolation hochmolekularer DNA75 3.6 Die Isolation von RNA76 3.7 Tipps zum Erzielen hoher Ausbeuten bei der Isolation von Nukleinsäuren78 3.8 Quantifizierung von Nukleinsäuren79 3.8.1 DNA-Bestimmung im Photometer79 3.8.2 Konzentrationsbestimmung mittels optischer Dichte81 4 Polymerase-Kettenreaktion 4.1 Prinzip der Polymerase-Kettenreaktion85 4.2 Die Komponenten der PCR86 4.2.1 Die Ausgangs-DNA86 4.2.2 Thermostabile DNA-Polymerasen 86 4.2.3 Puffer, Magnesium und
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dNTPs89 4.2.4 Primer91 4.3 Geräte für die PCR93 4.4 Die Standard-PCR94 4.5 Ausgewählte PCR-Methoden94 4.5.1 Two-Step PCR94 4.5.2 Gradienten-PCR und Touch-Down PCR96 4.5.3 Nested PCR97 4.5.4 Multiplex PCR97 4.5.5 Einführen von Restriktionsschnittstellen98 4.5.6 Reverse Transkriptions-PCR (RT-PCR)99 4.5.7 Kolonie-PCR102 4.5.8 Quantitative PCR103 4.6 Anwendungen der PCR105 4.7 Optimierung der PCR-Reaktion105 5 Klonieren für Einsteiger 5.1 Restriktionsenzyme109 5.1.1 Restriktionsenzyme des Typs II110 5.1.2 Restriktionsenzyme im Labor113 5.1.3 Methylasen und Typ IIM-Enzyme115 5.1.4 Typ IIS-Enzyme116 5.2 Ligation116 5.3 (De)Phosphorylierung von DNA118 5.3.1 Dephosphorylierung118 5.3.2 Phosphorylierung 119 5.4 Enzyme für spezielle Aufgaben 121 5.5 Die Transformation von E. coli 121 5.6 Der Weg zum klonierten Gen 123 5.7 Der ungerichtete Einbau einer amplifizierten DNA in einen Vektor123 5.7.1 Die Klonierung über eine Restriktionsstelle124 5.7.2 TA-Klonierung und TOPO-Cloning 125 5.7.3 Klonierung in ein Letal-Plasmid 126 5.7.4 Zyklische Blunt End Klonierung 126 5.8 Der gerichtete Einbau von DNA in einen Vektor 127 5.9 Wenn es mal nicht klappt129 6 Vektoren 6.1 Plasmide 132 6.2 Klonierungsplasmide135 6.2.1 Blau-Weiss-Screening135 6.2.2 Letalvektoren138 6.3 Expressionsplasmide 139 6.3.1 Promotoren für Expressionsvektoren140 6.3.2 Weitere regulative Sequenzen141 6.3.3 Expression in das Periplasma141 6.3.4 Einschlusskörperchen [Inclusion Bodies]141 6.3.5 Tag-Sequenzen142 6.4 Reportergene142 6.5 Phagen 146 6.6 Phagemide147 6.7 Shuttle-Vektoren147 6.8 Künstliche Chromosome: YACs, BACs und PACs148 6.9 Hefen als Klonierungs- und Expressionssystem149 6.9.1 Hefe als Modellorganismus149 6.9.2 Vektoren für Hefe151 6.9.3 Transformation von Hefe152 6.10 Pflanzen als Bioreaktoren 152 6.10.1 Die Transformation von Pflanzen153 6.10.2 Transiente Transformationsverfahren155 6.11 Die Tran
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Autoren-Porträt von Thomas Reinard
Dr. Thomas Reinard lehrt an der Leibniz Universität Hannover.
Bibliographische Angaben
- Autor: Thomas Reinard
- 2021, 3., überarb. Aufl., 336 Seiten, 145 farbige Abbildungen, 145 Abbildungen, Masse: 17 x 24,1 cm, Kartoniert (TB), Deutsch
- Verlag: UTB
- ISBN-10: 3825287955
- ISBN-13: 9783825287955
- Erscheinungsdatum: 20.07.2021
Pressezitat
Aus: CLB 70. Jahrgang, Heft 09 - 10/2019 - Rolf KickuthEin Reiseführer durch molekularbiologische Methoden. [...] Das Buch zeichnet sich positiv durch eine Vielzahl vierfarbiger Abbildungen, Protokollen und Tabellen aus. "Tipp"-Kästen sowie "Gut zu wissen"-Kästen unterstreichen wichtige Punkte. Das Buch gibt damit immer wieder Anlass für den Einstieg in ein weiteres Thema. Damit wird es dem Anspruch des Autors gerecht, ein "Reiseführer durch das zunächst unentdeckte Land molekularbiologisch geprägter Lebenswissenschaften mit all ihren Facetten" zu sein.
Aus: ekz-Informationsdienst, Themelidis, ID bzw. IN 2011/08
Dieses Buch stellt die gängigsten molekularbiologischen Labormethoden gut verständlich dar. Es richtet sich an Bachelor- und Masterstudenten im Bereich der Lebenswissenschaften und vermittelt zum einen die Grundlagen der Laborarbeit, Aufreinigung von DNA, RNA und Proteinen, Polymerasekettenreaktion und Klonierungsstrategien und vieles mehr bis hin zu molekularbiologischen Methoden für Fortgeschrittene. Vergleichstitel hierzu sind "Der Experimentator: Molekularbiologie/Genomics" (ID 31/02) und "Gentechnische Methoden" (ID 15/00). Das vorliegende Buch ist gut strukturiert und eignet sich sehr gut für Bibliotheken an Hochschul- und Wissenschaftsstandorten.
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